摘要

目的: 通過觀察高膽汁酸血癥狀態(tài)下家兔支氣管肺泡灌洗液表面張力的變化以及膽汁稀釋液和5種不同游離膽汁酸在體外對家兔支氣管肺泡灌洗液表面張力的影響，為認(rèn)識膽汁酸調(diào)節(jié)呼吸功能提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

方法: 30只新西蘭雄性大白兔，使用0.9%生理鹽水做支氣管肺泡灌洗，肺泡灌洗液進(jìn)行表面張力測定。實(shí)驗(yàn)一組測定高膽汁酸血癥家兔動物模型肺泡灌洗液表面張力的變化；實(shí)驗(yàn)二組比較了生理鹽水與不同稀釋度膽汁液表面張力及對肺泡灌洗液表面張力的影響；實(shí)驗(yàn)三組比較了5種不同游離膽汁酸水溶液表面張力及對支氣管肺泡灌洗液表面張力的影響。

結(jié)果: (1)高膽汁酸血癥狀態(tài)下家兔動物模型肺泡灌洗液表面張力與對照組相比明顯升高(P<0.05)；(2)支氣管肺泡灌洗液中加入不同稀釋度(1:15、1:10、1:5)的膽汁稀釋液，肺泡灌洗液表面張力就增加了21.15%、26.09%、19.64%(P<0.001)；(3)5種游離膽汁酸水溶液中UDCA對支氣管肺泡灌洗液表面張力沒有明顯影響(P>0.05)，其他4種游離膽汁酸都可以升高支氣管肺泡灌洗液表面張力(P<0.001)，CDCA增加了16.10%，CA增加了21.66%，LCA增加了14.21%，DCA增加了13.05%。

結(jié)論: 體內(nèi)實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)高膽汁酸血癥狀態(tài)下，肺泡灌洗液表面張力明顯升高。體外實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步證明膽汁稀釋液可以增加支氣管肺泡灌洗液的表面張力；5種游離膽汁酸水溶液中除UDCA外其他4種游離膽汁酸都可以升高支氣管肺泡灌洗液表面張力，說明這四種游離膽汁酸可能可以通過乳化肺泡表面活性物質(zhì)，增加了肺泡表面張力，影響呼吸功能。

1 材料和方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動物、藥品與方法

新西蘭雄性大白兔30只，體質(zhì)量在2.0~2.5kg之間，每組10只，由南方醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動物中心提供，合格證號：SCXK(粵)2011-0015。藥物鵝脫氧膽酸(CDCA)、脫氧膽酸(DCA)、膽酸(CA)、石膽酸(LCA)和熊脫氧膽酸(UDCA)由上海一基化學(xué)試劑公司提供。

①高膽汁酸血癥家兔動物模型制作：用1:10稀釋度膽汁液10ml耳緣靜脈注射，當(dāng)呼吸功能明顯加強(qiáng)加快時立即空氣栓塞至死，手術(shù)收集肺泡灌洗液，收集方法如②；

②支氣管肺泡灌洗液的收集：動物空氣栓塞至死，立即手術(shù)，取出氣管及左右肺，由氣管注入0.9%生理鹽水50ml做肺泡灌洗，反復(fù)3次，抽吸肺泡灌洗液40ml左右，放置5min用于表面張力測定。采集過程中肺泡灌洗液不得有血跡污染；

③表面張力的測定：采用芬蘭Kibron公司生產(chǎn)的Delta-8全自動高通量表面張力儀測定肺泡灌洗液的表面張力。將靜置5分鐘后的灌洗液樣本注入儀器專用96孔測試板中，每孔加入50 μL樣液，使表面活性物質(zhì)充分分布均勻。該儀器基于最大拉力法（du Noüy-Padday法）進(jìn)行測量：通過高精度微量天平監(jiān)測金屬探針從液面拉脫時所需的最大力，自動計算并直接輸出表面張力值（測量范圍：10–100 mN/m，精度：±0.2 mN/m）。測量前需對96孔板進(jìn)行預(yù)處理，確保無油脂、洗滌劑等活性物質(zhì)殘留；儀器在每次測量前后自動加熱清洗探針（1000℃），避免交叉污染。全部樣品測量過程約3分鐘內(nèi)完成，系統(tǒng)自動記錄并分析數(shù)據(jù)。

1.2 實(shí)驗(yàn)分組

①高膽汁酸血癥家兔動物模型肺泡灌洗液表面張力的變化：(A)耳緣靜脈注射0.9%生理鹽水10ml，獲取的支氣管肺泡灌洗液，進(jìn)行表面張力的測定，作為對照組；(B)耳緣靜脈注射1:10稀釋度膽汁液10ml，獲取的支氣管肺泡灌洗液，進(jìn)行表面張力的測定；②不同稀釋度膽汁液表面張力及對肺泡灌洗液表面張力的影響。(A)生理鹽水組：測定0.9%生理鹽水表面張力作為對照；(B)膽汁稀釋液組：1ml兔的膽囊膽汁經(jīng)0.9%生理鹽水按1:15、1:10(C)、1:5(D)稀釋，測其混合溶液的表面張力；(E)支氣管肺泡灌洗液組：對獲取的支氣管肺泡灌洗液，進(jìn)行表面張力的測定，作為對照；(F)膽汁稀釋液加肺泡灌洗液組：支氣管肺泡灌洗液中分別加入1:15、1:10(G)、1:5(H)膽汁稀釋液各1ml，混合，對其混合溶液進(jìn)行表面張力的測定；③5種不同游離膽汁酸水溶液表面張力及對支氣管肺泡灌洗液表面張力的影響：(A)生理鹽水組：測定0.9%生理鹽水表面張力作為對照；(B)5種不同游離膽汁酸水溶液組：用0.9%生理鹽水、適量麥芽糖糊精配置CDCA、DCA、CA、LCA和UDCA5種單品水溶液，終濃度分別為2mg/ml；測定其水溶液的表面張力；(C)支氣管肺泡灌洗液組：對獲取的支氣管肺泡灌洗液，進(jìn)行表面張力的測定，作為對照；(D)5種不同游離膽汁酸水溶液加肺泡灌洗液組：支氣管肺泡灌洗液中分別加入5種不同游離膽汁酸水溶液各1ml，混合，對其混合溶液進(jìn)行表面張力的測定。

1.3 統(tǒng)計學(xué)方法

實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)均用SPSS17.0軟件進(jìn)行處理，實(shí)驗(yàn)結(jié)果以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，采用配對t檢驗(yàn)進(jìn)行分析，P<0.05表明差異有顯著性。